内蒙古大兴安岭林区人埃立克体病自然疫源地的调查

摘要：目的 人粒细胞埃立克体病和人单核细胞埃立克体病都是近10年来发现的2种经蜱传播的自然疫源性疾病.这2种病的公共卫生学意义已受到了许多国家的关注.由于病原体是专性细胞内寄生菌,直接培养和纯化较为困难.我们根据这2种埃立克体的16S rRNA基因序列,构建了一系列PCR引物对,对采自我国大兴安岭等北方地区的蜱、动物脏器和人血标本进行PCR扩增,并对扩增出的产物进行DNA序列分析,以期查清有可疑蜱媒地区是否存在埃立克体感染,并通过这次调查为今后进一步开展系统研究提供参考.方法与结果 本研究采用半巢式PCR检测蜱标本2种埃立克体的带菌率.结果首次从内蒙古大兴安岭采集的全沟硬蜱和森林革蜱,新疆精河采集的全沟硬蜱和草原革蜱中扩增出390bp的特异和人单核细胞埃立克体16S rRNA基因片段;同时检测的大兴安岭的嗜群血蜱和北京灵山采集的长角血蜱均未扩增出相应的片段.大兴安岭莫尔道嘎林业局采集的全沟硬蜱携带此基因的阳性率为39.06%(25/64),森林革蜱为10.00%(7/70),2种蜱的带菌率有显著差异(χ2=15.53,P＜0.01).新疆精河采集的蜱携带EC率也是全沟硬蜱(11组/190,小阳性率为5.79%)高于森林革蜱(1组/60,小阳性率为1.67%),但差别不显著(χ2=1.30,P＞0.25).还从大兴安岭林区捕捉的一只大林姬鼠的脏器中检测到这一16S rRNA基因片段.对一只从莫尔道嘎采集的全沟硬蜱蜱标本进行近1500bp的人单核细胞埃立克体16S rRNA全基因扩增与序列分析,结果扩增出的序列与美国一株人单核细胞埃立克体(GenBank注册号U23503)的相应序列完全相同.同样应用半巢式PCR和序列分析技术,从蜱标本中扩增出441bp的特异的人粒细胞埃立克体16SrRNA基因片段.内蒙古大兴安岭莫尔道嘎采集的全沟硬蜱和森林革蜱人粒细胞埃立克体的阳性率分别是6.25%(4/64)和2.86%(2/70);内蒙古大兴安岭乌尔旗汗采集的全沟硬蜱和嗜群血蜱的阳性率分别为3.81%(小阳性率,8组/210)和2%(1/50);新疆精河采集的全沟硬蜱和草原革蜱小阳性率分别为3.16%(6组/190)和1.67%(1组/60).这是首次在亚洲从蜱标本中检测到人粒细胞埃立克体.同时检测的北京灵山采集的长角血蜱未扩增出相应的片段.对一只从莫尔道嘎采集的全沟硬蜱标本进行近1500bp的人粒细胞埃立克体16S rRNA全基因分析,结果 扩增出的序列与美国一株人粒细胞埃立克体(GenBank注册号U02125)的相应序列完全相同,一个碱基不差.另外还从内蒙古大兴安岭采集的森林工人血标本中扩增出特异的EC和人粒细胞埃立克体16SrRNA基因片段.这是首次在亚洲从人血中扩增出人埃立克体DNA.对一份人血标本进行近1500bp的人粒细胞埃立克体16S rRNA全基因分析,结果仅在第81位与美国这株人粒细胞埃立克体差一个碱基,相差的位置正好位于高变区.结论根据检测结果,本研究建立的系列半巢式PCR扩增方法可以快速、灵敏地检测蜱、脏器、血等标本中的EC和人粒细胞埃立克体,并能较快地分析出其16S rRNA全基因.据报道,莱姆病的流行区往往也是人埃立克体病的流行区.为此我们在大兴安岭林区进行了人埃立克体病和莱姆病的流行病学调查.血样检测发现了人粒细胞埃立克体和EC 16S rRNA基因阳性的病例共6名,病例均有近期蜱咬史,有埃立克体病的临床表现,潜伏期也相符;血清抗体检测发现检测人群中有HGE阳性抗体.2种病例的发现均为亚洲之首次.通过莱姆病螺旋体感染流行因素的单因素和多因素Logistic回归分析,发现在调查的流行因素中,职业和蜱咬史是影响该疫区人群感染莱姆病螺旋体的主要危险因素.这一调查结果也为该地区人埃立克体病和其他蜱传病的防治提供了参考.